Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Эти результаты также могут служить для демонстрации изменчивости результатов, получаемых данным аналитическим методом, в ходе испытания и в разные дни.
4. УСТОЙЧИВОСТЬ
Устойчивость аналитического метода — мера его способности выдерживать воздействие малых, но определенных изменений параметров метода, являющаяся показателем его надежности при обычном использовании.
Оценка надежности должна проводиться в фазе разработки. Она должна показать надежность аналитической процедуры с учетом определенных вариаций параметров метода. Для случая МАНК, небольшие изменения параметров метода могут иметь решающее значение. Однако, в ходе разработки метода его устойчивость может быть продемонстрирована небольшим изменением концентраций реагентов (например, MgCl2, праймеров или dNTP). Для демонстрации устойчивости не менее 20 РНК HCV-отрицательных пулов плазмы, отобранных случайным образом и инфицированных РНК HCV с получением конечной концентрации, в три раза превышающей заранее определенное 95% граничное значение, должны быть испытаны и признаны положительными.
Проблемы с устойчивостью могут возникнуть также в связи с методами, в которых экстракции вирусной РНК предшествует стадия ультрацентрифугирования. Поэтому для испытания устойчивости таких методов не менее 20 пулов плазмы, содержащих различные уровни РНК HCV, но не содержащих специфических антител к HCV, должны быть испытаны и признаны положительными.
Предотвращение перекрестной контаминации должно быть продемонстрировано путем точной детекции панели из не менее 20 образцов, попеременно заполненной образцами отрицательных пулов плазмы и отрицательных пулов плазмы, инфицированных высокими концентрациями HCV (не менее 100-кратного 95% граничного значения или не менее 104 МЕ/мл).
5. ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА
Для таких биологических испытаний, как МАНК, имеется вероятность возникновения специфических проблем, которые могут повлиять как на валидацию,
так и на интерпретацию результатов. Методики испытаний должны быть четко описаны в форме стандартных операционных процедур (СОП). В них должно указываться:
- способ отбора проб (тип контейнеров и т. д.),
- приготовление мини-пулов (по потребности),
- условия хранения до анализа,
- точное описание условий испытания, включая меры предосторожности против перекрестной контаминации и деструкции вирусной РНК, используемых реагентов и стандартных препаратов,
- точное описание используемой аппаратуры,
- детальные формулы для вычисления результатов, включая статистическую обработку.
В качестве удовлетворительной проверки соответствия системы и надежности аналитической процедуры, когда бы она ни использовалась, может быть рекомендован подходящий контроль процесса (например, подходящее разведение стандартного образца вируса гепатита С BRР или образец плазмы, инфицированной HCV, калиброванным в сравнении с Международным Стандартном HCV ВОЗ 96/790).
Техническая квалификация: каждой критической части используемого оборудования должна соответствовать программа квалификации по установке и эксплуатации. После замены критически важного оборудования (например, устройств для термоциркуляции) должна быть документально подтверждена производительность путем проведения параллельного испытания в отношении 8 повторных образцов пула плазмы, инфицированного РНК HCV с получением конечной концентрации, соответствующей предварительно определенному трехкратному 95% граничному значению. Все результаты должны быть положительными.
Квалификация оператора: в отношении каждого оператора, принимающего участие в испытании, должна действовать соответствующая квалификационная программа. Для подтверждения соответствующего уровня подготовки каждый оператор должен провести испытание не менее 8 повторяющихся образцов пула плазмы, инфицированного РНК HCV с получением конечной концентрации, соответствующей предварительно определенному трехкратному 95% граничному значению. Это испытание (8 повторяющихся образцов) должно быть повторено дважды, в два различных дня. Таким образом, должно быть проведено 24 испытания на протяжении трех дней. Все результаты должны быть положительными.
2.6.22. АКТИВИРОВАННЫЕ ФАКТОРЫ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ
При необходимости определяют количество присутствующего гепарина (2.7.12) и нейтрализуют его добавлением протамина сульфата R (10 мкг прота-мина сульфата нейтрализуют 1 МЕ гепарина). Готовят разбавления испытуемого препарата в соотношениях 1:10 и 1:100 с использованием трис-(гидроксиметил)-аминометанового буферного раствора рН 7,5 R. Ряд пробирок из полистирола помещают в водяную баню с температурой 370С и добавляют к каждой из пробирок по 0,1 мл плазмы с пониженным содержанием тромбоцитов R и по 0,1 мл подходящего разведения цефалина R или заменителя тромбоцитов R. Выдер-
живают в течение 60 секунд. К каждой пробирке добавляют либо 0,1 мл одного из разведений, либо 0,1 мл буферного раствора (контрольная пробирка). К содержимому каждой пробирки немедленно добавляют 0,1 мл предварительно нагретого до 370С раствора кальция хлорида R концентрацией 3,7 г/л и в течение 30 минут от момента первоначального разведения измеряют время между добавлением раствора хлорида кальция и формированием сгустка. Результаты считают достоверными, если время коагуляции в контрольной пробирке составило от 200 до 350 секунд.
